Diabetologia：激活但功能损坏的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失胰脏自身特异性到消失1同型乳癌临床研究症状的成果数万人在学龄前时期就有很好的详细描述，多个胰脏自身特异性当中性的学龄前当；还有70%在肝细胞转换后10年内当中风乳癌，而随访15年的学龄前这一比例减再加到84%。相比之下之下，占到临床研究1同型乳癌一半以上的同型1同型乳癌的患病机制还没有得到充分的研究者。

越发多的人开始运用于分期系统来定义1同型乳癌的成果：个微在消失多种胰脏自身特异性时转回第1先决条件，消失血糖极度时转回第2先决条件，消失症状时转回第3先决条件。一些多发胰脏自身特异性当中性的个微，在1期和2期，成果较慢速，并发展为患病的1同型乳癌。我们在此之前详细描述了一两组在首次样品到多种胰脏自身特异性采样后多于10年无乳癌的变慢速成果者，这两组病人人数再加，但特征非常确实。随后，我们发现胰脏自身抗体特异性CD8+T巨噬细胞质子化在成果比较慢速的病人当中整微不存在，但在近期患病和由来已久的乳癌病人当中很易于样品到。这确实声称，与成果病人相比之下，这些病人自身免疫质子化的恒定加强。

早期研究者声称，尽管恒定性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但乳癌病人存在一些动态缺陷，其当中之外对IL-2的质子化技能增大。此外，乳癌病人当中的不稳定性CD4+T巨噬细胞确实对恒定更具抵抗性，展示出新为不稳定性T巨噬细胞的依赖性减弱，自然消除的Treg和粘液消除的诱发Treg，以及抗体经历的CD4+T巨噬细胞当中IL-2质子化减弱。本研究者的旨在是详细描述了CD4+恒定性T巨噬细胞(Treg)在一小群极比较慢速成果者当中的特征，他们的平均年纪为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以人群辅以的斜向研究者，在21岁以下患病的病人亲属当中检查1同型乳癌的危险因素。我们在此之前详细描述了长期比较慢速成果者的特征，他们保持多重胰脏自身特异性当中性超过10年，但没有消失乳癌的临床研究症状，慢速性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续保持无乳癌并愿意提供大量血液采样的比较慢速成果者扩展到T和B巨噬细胞动态分析。在目前的研究者当中，8名慢速成果者(SP两组)，当中位年纪43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身特异性当中性。所有的与会者都所处1同型乳癌成果的1期，尽管一些人随后夺去了胰脏自身特异性对某些抗体的当中性质子化，然而，一名病人不太可能所处2期多于6年，但没有消失临床研究症状，一名病人被检验为乳癌，该人会72岁，在采集实验采样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在建模当中对该ADP顺利完成了单独分析。转化外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞练成和T巨噬细胞依赖性试验分析ADP当中Treg的振幅、表同型和动态。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和回归)顺利完成无都由聚类分析，分析Treg表同型。

结果：与保健ADP相比之下，来自慢速成果微的无意识CD4+T巨噬细胞的都由聚类结果显示，激已逝的无意识CD4+ Treg振幅减再加，与糖皮质激素诱发的TNFR无关蛋白(GITR)阐释减再加有关。一名HbA1c升高的病人与成果比较慢速者和匹配的非常少相比之下，Treg谱有所不同。动态分析声称，与保健ADP相比之下，来自比较慢速成果微的Treg介导的CD4+不稳定性T巨噬细胞依赖性明显受到破坏。展示出新为对不稳定性CD4+T巨噬细胞CD25和CD134阐释的依赖性减再加。

由此可知1 熟悉的表同型分析结果显示，CD4+Treg亚同型在慢速成果缓冲区当中减再加。由FlowSOM聚合的Treg室，有数在来自所有ADP的已逝CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标上物阐释比对出新10个元簇:无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)运用于9个不同Treg标上聚合的10个元簇的MST。每个终端代表一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在终端两组周围剪裁。每个终端当中的饼由此可知回应单个标上的阐释级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以结果显示整微标上阐释。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)聚合由此可知，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较丰度为每个metacluster装入该线由此可知(丰度> 0.05%)确定为HD和SP两组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T巨噬细胞(l)。黄色左上角代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分两组符号秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 运用于CITRUS的预测模同型证明，Treg振幅的减再加是成果比较慢速的图标。分级相关联(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的歧异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的代表性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR阐释顺利完成转化，模拟FlowSOM群微。(b) HD(黑点)和SP(星点)两组以及ADPSP 606(黄色)当中CD25+ cd127的振幅概述由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联有界的装入该线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)经济作物簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3阐释强度后处理，圆点突出新的簇被标识为SP和HD缓冲区之间的不同。(j)装入该线由此可知结果显示了在SP(星点)和HD(灰点)两组当中，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的比较丰度(比例)。(k)直方由此可知结果显示每个簇的表同型(粉红色)和Treg标上比较阐释与背景阐释(红色);上列，缓存Treg_3;示例一行，缓存Treg_4。背景与所有其他簇当中标上的阐释有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分两组符号秩检验

由此可知3 与保健献血者相比之下，成果比较慢速者无意识treg的GITR减再加。每个无意识CD4+T巨噬细胞元簇(无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个阐释标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的阐释热由此可知(sp606不之外在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR阐释相联，结果显示直方由此可知(c)和概述由此可知(d)。Wilcoxon分两组符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有ADP之外，p< 0.05(红色)ADPSP 606和匹配的HD不之外在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR阐释，从分级相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(黄色)相联，结果显示直方由此可知(e)和概述由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon分两组符号秩检验

由此可知4 来自比较慢速成果的CD4+ treg巨噬细胞依靠不稳定性CD4+T巨噬细胞的技能增大。SP两组用红色的该线和左上角回应，HD两组用银色的该线和左上角回应，黄色的该线/左上角回应ADPsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(；也者)被标上为CFSE, Treg按检视的比例滴定。用抗CD3 /28微珠还原巨噬细胞，培训3在此之后顺利完成流式巨噬细胞练成样品。(a-d)与CD4+；也者比较应的treg培训(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百份。运用于当中性对照(激已逝的响应巨噬细胞都有treg)计算依赖性百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 不稳定性CD4+T巨噬细胞对比较慢速成果的T巨噬细胞还原的依赖性更敏感。SP两组用红色的该线和左上角回应，HD两组用银色的该线和左上角回应，黄色的该线/左上角回应ADPsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标上，treg按检视的比例滴定。用抗CD3 /28微珠还原巨噬细胞，培训3在此之后顺利完成流式巨噬细胞练成(CD25反染)和巨噬特异性分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性前年(b)。(c,d) CD25依赖性前年(c)和CD134依赖性前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训当中的阐释。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们得出新的事实是，来自比较慢速成果子的还原无意识CD4+Treg在GITR阐释当中得到了扩展和丰富多彩，阐释了实质性研究者Treg在1同型乳癌风险个微当中的异质性的必要性。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28