Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐引入

从第一次注意到去甲自身血清到注意到1DF肾病临床深入研究疼痛的方面率在幼儿时期就有很好的描述，多个去甲自身血清非典型的幼儿里有70%在血清类比后10年内患上肾病，而随访15年的幼儿这一人口比例增大到84%。相对之下，九成临床深入研究1DF肾病一半以上的DF1DF肾病的患病机制还没有受益充分的深入研究。

越来越多的人开始应用于已确定系统来定义1DF肾病的方面：个纤在注意到多种去甲自身血清时转回第1阶段，注意到血糖极度时转回第2阶段，注意到疼痛时转回第3阶段。一些多发去甲自身血清非典型的个纤，在1期和2期，方面较快，并发展为患病的1DF肾病。我们以后描述了一一组在首次扫描到多种去甲自身血清样本后非常少10年无肾病的极快方面者，这一组病患者人数少，但外观上非常完全一致。随后，我们推断出去甲自身上皮细胞特异性CD8+T细胞膜反应会在方面缓快的病患者里基本不存在，但在全面性患病和长期以来存在的肾病病患者里很容易扫描到。这可能得出结论，与方面病患者相对，这些病患者自身免疫反应会的可调提升。

早期深入研究得出结论，尽管可调性T细胞膜(Treg)数量但会，但肾病病患者存在一些新功能局限性，其里包括对IL-2的反应会灵活命性降低。此外，肾病病患者里的震荡CD4+T细胞膜可能对可调更具抵抗性，表现为震荡T细胞膜的诱导减弱，自然激发的Treg和纤外激发的诱导Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T细胞膜里IL-2反应会减弱。本深入研究的目的是描述了CD4+可调性T细胞膜(Treg)在群集极缓快方面者里的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX深入研究是一项以人群为基础的纵向深入研究，在21岁以下确诊的病患者直系亲属里检查1DF肾病的危险因素。我们以后描述了长期以来缓快方面者的外观上，他们保持稳定多重去甲自身血清非典型超过10年，但没有注意到肾病的临床深入研究疼痛，快性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保持稳定无肾病并愿意提供者大量血液样本的缓快方面者纳入T和B细胞膜新功能深入深入研究。在目前的深入研究里，8名快方面者(SP一组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的去甲自身血清非典型。所有的自发性都处于1DF肾病方面的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身血清对某些上皮细胞的非典型反应会，然而，一名病患者已经处于2期非常少6年，但没有注意到临床深入研究疼痛，一名病患者被诊断为肾病，该受试者72岁，在采自实验样本时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据深入深入研究里对该供纤透过了单独分析。剥离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多表达式流式细胞膜拳法和T细胞膜诱导飞行测试分析供纤里Treg的kHz、表DF和新功能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)透过无监督聚类深入深入研究，分析Treg表DF。

结果：与身心健康供纤相对，来自快方面纤的梦境CD4+T细胞膜的监督聚类结果显示，激活命的梦境CD4+ TregkHz增大，与糖皮质激素诱导的TNFR就其蛋白(GITR)表述增大有关。一名HbA1c下降时的病患者与方面缓快者和类比的对照一组相对，Treg谱有所有所不同。新功能深入深入研究得出结论，与身心健康供纤相对，来自缓快方面纤的Treg激活命的CD4+震荡T细胞膜诱导明显损毁。表现为对震荡CD4+T细胞膜CD25和CD134表述的诱导增大。

平面图1 深入的表DF深入深入研究结果显示，CD4+Treg亚DF在快方面队列里增大。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有供纤的活命CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标有物表述鉴定显现出10个元簇:梦境T细胞膜_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞膜;HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)应用于9个有所不同Treg标有生成的10个元簇的MST。每个链表亦然一个空降兵(100个空降兵)，极大的元空降兵(10个元空降兵)在链表一组周围装裱。每个链表里的饼平面图暗示单个标有的表述级别。(b)每个元聚类的热平面图，以结果显示整纤标有表述。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)生成平面图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于丰度为每个metacluster罐终点站平面图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP一组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞膜(l)。蓝色左上方亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 应用于CITRUS的预测模DF断定，TregkHz的增大是方面缓快的标志。分级离子通道(a - f)和玉米深入深入研究(g-k)相对较SP自发性和类比的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的亦然性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述透过剥离，各种类型FlowSOM群纤。(b) HD(横纹)和SP(蓝点)一组以及供纤SP 606(蓝色)里CD25+ cd127的kHz统计平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道孙子集的罐终点站平面图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，箭头突显现出的簇被比对为SP和HD队列二者之间的有所不同。(j)罐终点站平面图结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)一组里，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对于丰度(人口比例)。(k)直方平面图结果显示每个簇的表DF(白色)和Treg标有相对于表述与背景表述(金色);上列，缓存Treg_3;下面偷偷地，缓存Treg_4。背景与所有其他簇里标有的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验

平面图3 与身心健康献血者相对，方面缓快者梦境treg的GITR增大。每个梦境CD4+T细胞膜元簇(梦境T细胞膜_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞膜;HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个表述标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR表述接在，结果显示直方平面图(c)和统计平面图(d)。Wilcoxon配对大写秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有供纤包括，p< 0.05(金色)供纤SP 606和类比的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR表述，从分级离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(蓝色)接在，结果显示直方平面图(e)和统计平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写秩检验

平面图4 来自缓快方面的CD4+ treg细胞膜控制震荡CD4+T细胞膜的灵活命性降低。SP一组用金色的终点站和左上方暗示，HD一组用金色的终点站和左上方暗示，蓝色的终点站/左上方暗示供纤sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜透过分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标有为CFSE, Treg按推论的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠活命化细胞膜，指导3在此之后透过流式细胞膜拳法扫描。(a-d)与CD4+反之亦然者相对于应的treg指导(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者指导。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE诱导多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导多于。应用于非典型对照(激活命的作出反应会细胞膜不含treg)计算诱导多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对较测试

平面图5 震荡CD4+T细胞膜对缓快方面的T细胞膜活命化的诱导更极端。SP一组用金色的终点站和左上方暗示，HD一组用金色的终点站和左上方暗示，蓝色的终点站/左上方暗示供纤sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜透过分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标有，treg按推论的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠活命化细胞膜，指导3在此之后透过流式细胞膜拳法(CD25反染)和细胞膜因孙子深入深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者协力指导。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE诱导百分率(b)。(c,d) CD25诱导百分率(c)和CD134诱导百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导里的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对较测试

结论：我们得显现出的结论是，来自缓快方面孙子的活命化梦境CD4+Treg在GITR表述里受益了扩展和丰富，强调了进一步深入研究Treg在1DF肾病几率个纤里的异质性的合理性。

原文显现来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28